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抗體制備和純化

抗體制備和純化

抗體制備:重組蛋白抗原

目前抗體制備常采用多肽抗原及重組蛋白質抗原,這兩種方法各有優缺點,需結合實驗需求進行選擇。        

重組蛋白質抗原上往往帶有多個不同的抗原決定簇,其中有些是順序決定簇,有些為結構決定簇。利用變性的抗原免疫動物獲得多克隆抗體是針對各個抗原決定簇的抗體的混合物,在一般應用中能夠用于檢測天然結構或變性的目標蛋白。利用變性蛋白做為免疫原的一個附帶的好處是變性蛋白往往有更強的免疫原性,能夠刺激動物產生強的免疫應答。        

用做抗原目的的蛋白質一般選擇使用大腸桿菌表達體系,因為該體系時間與金錢成本最低。為了提高目標蛋白質表達的可能性與純化的方便性,人們有時只表達目標蛋白的一個小的片段如特定的結構域。大腸桿菌系統是欣百諾最早建立的成熟表達體系,有一系列設計完美的表達載體與非常成熟的表達培養條件,能夠在較短時間內獲得基因表達產物,且所需的成本相對較低。        

如果制備抗體的目的單純用于wb檢測,采用合成的小肽作為抗原是經濟快速的,但是存在由于肽段選擇不合適造成的免疫原性弱或者無免疫原性的風險,由于抗體制備需要較長的周期,因此利用多肽抗原制備抗體時,常常選取兩三段不同的肽段以保證實驗的成功率。      

一般用多肽制備的抗體只能識別順序決定簇,用于檢測非變性狀態的抗原時效果很差,特別是制備中和抗體時,需要最大可能的保持抗原的天然結構。重組抗原在免疫原性、表位多樣性上遠優于多肽。



1step

重組蛋白抗原表達及純化制備

免疫用的重組蛋白抗原 純度要求大于80%,更高的純度雖然理論上可以獲得特異性更好的抗體,實際操作過程中動物總是要產生大量非特異性抗體,從而掩蓋了抗原純度所帶來的收益。
抗原序列的決定:            

客戶提供目標蛋白序列或cDNA序列,我們將進行抗原性分析預測,并結合您的實際需要,選取最佳的區域作為抗原序列。
此步驟服務說明請查考 重組蛋白表達與純化技術服務(E. coli表達系統)。



2step

免疫動物/采血 :


目前我們僅提供兔子的多抗制備,采用的動物為SPF級新西蘭大白兔。每兩周免疫一次,共免疫5次。
ELISA檢測,確保免疫后血清效價大于1:8000。

客戶需要提供的材料:
若客戶提供交聯好的蛋白,請與客服人員溝通其具體要求。

提供客戶:>10mg兔多抗,同時也提供1ml 免疫后血清,1ml免疫前血清對照,效價檢測結果。

服務周期:10周左右            


專注
品質


1

分子生物學
酶類


1余種

細胞
因子


1余種

            上海近岸科技有限公司成立于2004年,是國內首家專門從事重組蛋白質制備工藝開發及生產的高科技企業。
novoprotein 隸屬于上海近岸科技有限公司,提供重組蛋白制備相關的全套技術服務。

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