服務Service

蛋白表達純化

蛋白表達純化

重組蛋白表達與純化技術服務——原核表達系統(E. coli表達系統)

近岸目前成熟的表達體系包括:

原核表達系統(大腸桿菌 E. coli表達系統)、酵母表達系統(P. Pichia表達系統)、昆蟲細胞表達系統(BEVS表達系統)和哺乳動物細胞表達系統,每種表達系統都具有克級以上的制備能力。近岸建立了嚴格的產品質控體系及一整套完善的客戶服務流程、保密制度以確保為客戶提供優質的產品及一流的服務。

原核表達系統技術服務按步驟收費,您可以選擇從以下任意一步開始提供服務或僅選擇其中的單獨一步,詳細價格請垂詢。 如需前期分子生物學技術服務請參考相關內容。

1step

E. coli表達菌株篩選:

擴增并抽提構建好的表達質粒。
將表達質粒轉化到高效的E. coli表達菌株中。
至少挑選5個陽性克隆于LB培養基中擴增并誘導表達目標蛋白。
SDS-PAGE電泳檢測目標蛋白的表達情況,并挑選合適的陽性表達菌株用于目標蛋白的表達。
可提供表達菌株:DH5α,  BL21 (DE3), BL21 (DE3) pLys, Shuffle,Rosetta(DE3)pLysS,BL21(DE3) Chaperones, Rosetta-gami。

提供客戶:重組質粒的表達菌株及表達檢測報告。

服務周期:1周

2step

目標蛋白表達及純化:

搖瓶培養1L重組菌株,誘導表達目標蛋白。
通過親和,離子交換,疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。
利用蛋白酶去除不需要的純化標簽(Tag),再純化獲得所需的目標蛋白(可選,構建表達載體時需加入合適的蛋白酶切位點)。
通過SDS-PAGE電泳檢測每步結果并控制最終產品質量。
通過Western-blot驗證目標蛋白正確性。
提供客戶:純化好的目標蛋白1~5mg及純化報告。可按客戶要求提供含純化標簽(Tag)或切除純化標簽(Tag)的最終蛋白,純度最高可達95%以上。

時間:2-3周

            備注:
1. 如果沒有獲得目標蛋白,則需要按照步驟收費。如果最終得到的產品未達到合同要求而客戶又同意接受該產品,則雙方協商本步驟費用(給予客戶20%~50%折扣)。
2. 如果客戶需要詳細的純化工藝,包括詳細純化條件及每步結果,則需要加收相應費用。具體收費情況根據不同項目情況進行協商。
3. 因為每個重組蛋白的表達量及純化得率都不相同,我們最終根據實際情況將給客戶提供最少1mg,最多5mg的目標蛋白,所收取的費用是相同的。
4. 我們提供的最終產品一般為保存于常規緩沖液(Tris-HCl,PBS或乙酸-乙酸鈉緩沖液)中的蛋白質溶液,并且其中不含有尿素或鹽酸胍等變性劑。但因為我們無法為每個定制的蛋白建立活性檢測系統,所以我們無法保證最終產品的生物學活性,不過我們承諾將會按照最大可能保護其活性的方法來制備目標蛋白。 如果客戶一定要求目標蛋白活性,我們可以先提供約50μg純化后樣品供客戶檢測活性。若樣品活性不合格,我們不再提供目標蛋白給客戶并只收取本步驟費用的30% ,而如果樣品活性合格,我們將提供合同要求的相同質量的目標蛋白給客戶并需要加收本步驟費用的100%。 5. 每次Western-blot檢測最多7個樣品,因為要加入陽性對照,陰性對照以及Marker。本步驟只包含一次免費檢測,如果需要更多次檢測則需另收費。我們可以免費為客戶提供抗His-tag的一抗,如果客戶需要使用其他一抗,則需要客戶提供。另外由于Western-blot檢測結果受很多客觀因素影響,因此我們并不能確保檢測結果(可能會出現假陽性或是假陰性的結果)。如果結果不正常,我們可以免費重做一次。

3step

目標蛋白的再加工及詳細檢測

對生物學活性要求較高的純化后蛋白產品進行復性研究。
內毒素去除,除菌,凍干等進一步加工。
通過HPLC,質譜等方法詳細檢測目標蛋白的質量。 將目標基因亞克隆到合適的表達質粒上。

服務內容:

1. 復性研究:
利用多達18種不同復性緩沖液的體系,對目標蛋白進行小量復性試驗提供復性后樣品供客戶檢測。
可根據客戶要求,按照其中一種樣品的復性條件制備小量的復性蛋白。
可提供具體的復性緩沖液配方及復性工藝(需額外收費,具體收費金額需要根據不同項目情況進行協商)。
2. 除內毒素
3. 過濾除菌
4. 凍干

4step

大規模制備

如果想要純化獲得克級蛋白,需要使用發酵罐發酵獲得上百克到公斤級的菌體,novoprotein有比較成熟的發酵罐發酵平臺,可以進行大腸桿菌或者酵母菌的高密度發酵。
服務內容
1. 5L 小罐發酵(2.5L工作體積),周期2周
2. 50L 大罐發酵(25L 工作體積),一般可收獲1Kg左右菌體,周期2周
提供客戶:合格的目標蛋白及服務報告。

時間:2周



專注
品質


1

分子生物學
酶類


1余種

細胞
因子


1余種

            上海近岸科技有限公司成立于2004年,是國內首家專門從事重組蛋白質制備工藝開發及生產的高科技企業。
novoprotein 隸屬于上海近岸科技有限公司,提供重組蛋白制備相關的全套技術服務。

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