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二代測序文庫構建

NovoNGS? CUT&Tag High-Sensitivity Kit
(for Illumina?)

12次 / ¥11600


目錄號:N259-YH01


產品描述:

NovoNGS? CUT&Tag High-Sensitivity Kit (for Illumina?)是針對CUT&Tag法開發的專用試劑盒。CUT&Tag法是蛋白質-DNA互作研究的新方法,相較于傳統的ChIP-Seq具有以下優點:省時高效、所需的細胞量少(低至60個)、信噪比高、可重復性好等優點,甚至可用于單細胞水平測序。本試劑盒適用于哺乳動物細胞的蛋白質-DNA互作研究,酵母、植物等細胞通過相應的處理也可使用該試劑盒進行相關實驗。試劑盒提供CUT&Tag法所需的酶和緩沖液,所有組分都經過了嚴格的質量控制和功能驗證,部分需要自備的試劑已在說明書中列出。 


產品用途:

表觀基因組學、蛋白質-DNA互作研究,可替代ChIP-Seq等方法。 


產品性能:

本產品包含ChiTagTM酶與接頭孵育后形成的轉座復合體,1μl轉座體可以將100ng基因組DNA打斷成片段大小為200-1000bp的片段。使用本試劑盒可在10小時內完成從細胞收集到測序文庫構建全部流程。

CUT&Tag技術的基本原理為:在抗體引導下,ChiTagTM酶僅在目的組蛋白修飾標志、或轉錄因子、或染色質調控蛋白結合染色質的局部進行目的DNA的片段化,并釋放到細胞外,而絕大部分無關的染色質還留在細胞核內,因而整個實驗的信噪比大幅提高,同時簡化了實驗步驟。該方法可一管式高通量應用,并可與單細胞測序平臺“無縫”結合。ChiTagTM酶在在打斷基因組的同時加上接頭,不需要繁瑣的補平加A加接頭,在一天內可以完成從細胞到測序文庫制備全流程。

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1 DNA-Target Protein-Antibody-ChiTagTM結合示意圖


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2 CUT&Tag測序數據


片段化效果測試:

配置20μl片段化體系:

5×Reaction buffer,4μl;轉座復合體,1μl;DNA,50ng;ddH2O,To 20μl。

體系混勻后55℃反應10min,再加入5μl 5×Stop Buffer,混勻后55℃反應5min以終止反應。片段化產物可用于檢測或純化后建庫。如果打斷片段過長,可以增加轉座復合體用量,從而降低片段大小;反之,則減少轉座復合體用量。

1570698248371964.png


單鏈接頭序列:

Adaptor   1:

5’-TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAG-3’

Adaptor   2:

5’-GTCTCGTGGGCTCGGAGATGTGTATAAGAGACAG -3’

ME:  

5'-pCTGTCTCTTATACACATCT-3'


CUT&Tag Protocol

(詳見說明書)

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For research only



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